ویژگی های کیت  PAH SegCheck Kit v1.2

• ردیابی ژن بیماری در شجره نامه
• رفع شبه نمونه جنین با نمونه مادری
• رفع شبه آلودگی نمونه با نمونه دیگر
• تایید اصالت نمونه جنینی و تشخیص خطای جابجایی نمونه
• تعیین جنسیت نمونه
• تعیین هویت نمونه
• غربالگری اولیه آنیوپلوئیدی کروموزومی
• تشخیص و تمیز نمونه‌های جنین در چند قلوها
• تشخیص دیزومی تک والدی (هترودیزومی یا ایزودیزومی)
• تشخیص پدیده کراسینگ اور در بررسی HLA و ایجاد بیماری
• تشخیص موزاییسم جنین
• موزاییسم گنادی (بیشتر در اختلالات مرتبط با X)
• تایید نتایج تشخیص جهش به روش‌های مستقیم همچون DNA Sequencing، ARMS، MLPA، Gap PCR و NGS

اهمیت استفاده از کیت تشخیص بیماری فنیل کتونوریا

در اکثر کشورها، آزمایش قبل از تولد برای آنیوپلوئیدی‌های کروموزومی در عمل انجام می‌شود. اکثر روش‌های معمول (یعنی سه ماهه اول و دوم اولتراسوند و غربالگری بیوشیمیایی) دارای اشکالاتی هستند زیرا در تشخیص آنیوپلوئیدی‌های کروموزومی، مثبت کاذب یا منفی کاذب وجود دارد. QF-PCR مدتهاست که به یک روش انتخابی برای تشخیص سریع آنیوپلوئیدی‌های رایج کروموزومی تبدیل شده است.

با این حال، تکنیک‌هایی مانند QF-PCR و کاریوتایپ باید توسط متخصصان درخواست شده و بر روی نمونه‌های انتخابی جنین انجام شود. زیست فناوری کوثر با آگاهی از این کاستی‌ها، کیت‌های ™SegCheck را تولید کرده است که برای پیش از ۶۰ بیماری این کیت‌ها طراحی شده است و به موجب آن آزمایشگاه‌ها می‌توانند هر بیماری را همراه با غربالگری اولیه آنیوپلوئیدی‌ها به روش QF-PCR بدون نمونه‌برداری و هزینه اضافی تعیین کنند. حتی تست‌های NIPT (آزمایش پیش از تولد غیر تهاجمی) نیز تنها آنیوپلوئیدی را برای نمونه جنین مورد آزمایش قرار می‌دهد.

در صورتی که کیت ™SegCheck می‌تواند هم ژن بیماری و هم آنیوپلوئیدی‌ها را برای هر نمونه جنینی که تحت آزمایش تشخیص پیش از تولد قرار دارد، بررسی نماید. در واقع هر کیت ™SegCheck مارکرهای STR خاصی کروموزوم‌های ۱۳، ۱۸، ۲۱ و کروموزوم‌های جنسی همراه با مارکرهای STR خاص بیماری را در خود جای داده است.

مارکرهای STR از تکرارهای ۴ نوکلئوتیدی انتخاب شده‌اند تا تجزیه و تحلیل کمتر صورت گیرد و تفسیر آسان باشد. الل‌های حاصل از این مارکرهای STR می‌توانند در احراز هویت نمونه، رد آلودگی سلول‌های مادر و بسیاری از مزایای دیگر در یک آزمایش کمک کنند. بنابراین، از این مارکرهای کروموزومی می‌توان برای بررسی وجود آنیوپلوئیدی برای کروموزوم‌های آزمایش شده نیز استفاده کرد. در صورت مشکوک بودن به آنیوپلوئیدی، نمونه را می‌توان با مارکرهای بیشتری و با استفاده از روش QF-PCR مانند کیت‌های AneuQuick™ Kit v3.2 یا AneuQuick™ Extra Plus Kit v1.2 انجام داد.

هر آزمایشگاه تشخیص ژنتیک هنگام انجام تشخیص پیش از تولد با مشکلاتی مانند ترکیب نمونه‌ها و آلودگی سلول‌های مادری روبرو می‌شود. این خطاها می توانند منجر به تشخیص اشتباه و غربالگری منفی کاذب شوند.

عملکرد PAH SegCheck™ Kit v1.2 و خانواده کیت های ™SegCheck:

™SegCheck می‌تواند به هر آزمایشگاه ژنتیک پزشکی که تشخیص پیش از تولد دارد، کمک کند. از آنجایی که این کیت‌ها دارای مارکرهایی است که درون یا کنار ژن مختص به بیماری خاص می‌باشد و تفکیک (segregation) می‌شود، از این مارکرها برای ردیابی الگوی تفکیک و تحلیل پیوستگی ژنی (analysis linkage) می‌توان استفاده نمود. رسم هاپلوتیپ جهت تایید وراثت جهش ژن بیماری در جنین می‌باشد.

به طور مثال فرض کنید والدین جهش مشابهی داشته باشند و به دلیل تکثیر یک جانبه یا allelic drop out در هنگام تشخیص جهش در جنین به روش مستقیم، هموزیگوت نشان داده می‌شود که این جهش در رسم هاپلوتیپ و آنالیز آن در یک خانواده نشان می‌دهد که در واقع هتروزیگوت است که به دلیل ADO، ژن دیگر تقویت نشده است و بدین ترتیب جنین ناقل سقط می‌شد. دلیل اینکه کیت‌های ™SegCheck قادر است ADO را تشخیص دهد این است که در هر کیت ™SegCheck بین ۴ تا ۸ مارکر STR وجود دارد و یک نمونه نمی‌تواند ADO برای همه این مارکرها داشته باشد.

این روش به کار رفته در این کیت‌ها برای اکثر آزمایشگاه‌های ژنتیک پزشکی مولکولی که تشخیص قبل از تولد را انجام می‌دهند، ارزشمند خواهد بود. با این حال، می‌توانند توسط محققان دیگر برای اهداف دیگری مانند تفکیک ژنی یا ارثی یا حتی موزاییسم استفاده شود.

فنیل کتونوری (PKU) یک اختلال متابولیک ارثی است. این بیماری به صورت الگوی اتوزومال مغلوب به ارث می‌رسد. جهش در ژن PAH (فنیل آلانین هیدروکسیلاز) مسئول نوع کلاسیک این بیماری است. بیش از ۵۰۰ جهش عامل بیماری ایجاد شده است. غربالگری ناقلین، نوزادان و همچنین تشخیص پیش از تولد، در اکثر کشورها در حال انجام است.

PAH SegCheck™ Kit v1.2 یک کیت تشخیص مولکولی است که در مدت زمان کوتاهی افراد ناقل و یا مبتلا به فنیل کتونوری را تشخیص می‌دهد.  این کیت اصولاً بر اساس نشانگرهای STR و تکنیک QF PCR عمل می‌کند تا با تحلیل تفکیک و پیوستگی ژنی هاپلوتیپ (بر اساس روش Haplotyping)، ابتلا یا ناقل بودن نمونه جنین را تشخیص دهد.

استفاده از مارکرهای STR، همراه با تشخیص جهش به روش مستقیم، تشخیص پیش از تولد را دقیق‌تر و قابل اطمینان‌تر می‌کند. همراه با تشخیص نقص ژن، کیت PAH SegCheck™ v1.2 شامل مارکرهای STR اتوزومی است که جهت تشخیص آنیوپلوئیدی کروموزوم های ۲۱ ، ۱۸ ، ۱۳ ، X و Y بر اساس روش QF-PCR می باشد.

کیت تشخیصی PAH SegCheck™ v1.2  بر اساس ۱۶ مارکر با هتروزیگوسیتی بالا می باشد که شامل ۷  مارکر STR در پایین دست و بالادست ژن PAH  و ۶ برای غربالگری اولیه اختلالات شایع کروموزومی (۳ مارکر برای کروموزوم ۲۱، ۲ مارکر برای کروموزوم ۱۸ و ۱ مارکر برای کروموزوم ۱۳) و ۳ مارکر تعیین جنسیت است.

این کیت بر روی نمونه‌‌های DNA تخلیص شده از خون، مایع آمنیون (AF)، نمونه پرز جفتی جنین (CVS) و کارت DBC (کارت نگهدارنده DNA محصول شرکت زیست فناوری کوثر)، بافر لیز کننده خون BLB، بافر لیز کننده سلول‌های امنیوتیک AFL، و بافر لیز کننده پرزهای جفتی CVL قابل استفاده می‌باشد.

کیت مارکر های کیت تشخیص بیماری فنیل کتونوریا PAH SegCheck Kit v1.2

D12PAHSU3.3, D12PAHSU3.7, D12PAHS17.6, D12PAHI1, D12PAHSD3, D12PAHSD4.2, D12PAHSD4.8, D21S1446, D21S1414, D21S1411, D18S391, D18S1002, D13S325, DXS7132, AMXY و SRY.