کیت های MLPA

 | تاریخ ارسال: ۱۳۹۵/۱۰/۳۰ | 

AWT IMAGE

تحولی شگرف در تشخیص سریع و دقیق بیماریهای ژنتیکی انسانی

نمایندگی انحصاری: شرکت MRC Holland

شرکت زیست فناوری کوثر، نماینده انحصاری فروش کیت های MLPA ، مفتخر است اعلام نماید که علاوه بر فروش کیتهای MLPA ، آماده حل مشکلات کاربران MLPA آموزش آنها، خواندن( RUN کردن) نمونه های MLPA در دستگاه ABI 3130xI وتفسیر نتایج و حتی ارائه DNA های کنترل می باشد.

MLPA (Multiplex Ligation-dependent probe ampe Amplificatio)

روش MLPA یکی از جدیدترین و کارآمدترین روش های مولکولی برای تشخیص سریع و دقیق تعداد نسخه ژنی (deletion,duplication) و حتی جهش های نقطه ای در طیف وسیعی از بیماری های ژنتیکی انسانی می باشد. این روش قادر به سنجش کمی DNA و بررسی تعداد نسخه ژنی DNA و بررسی تعداد نسخه ژنی gene dosage در 40 تا 50 محل مختلف در یک واکنش ساده PCR می باشد. در این روش با طراحی مجموعه ای از پروب ها که هر کدام مکمل ناحیه مشخصی از ژنوم می باشند، تعداد نسخه ژنی (deletion,duplication) در یک منطقه را می توان مشخص نمود. اساس این روش بر پایه هیبرید شدن هر جفت پروب با توالی مشخصی در ژنوم به صورت اختصاصی می باشد. به طوری که حتی تغییریک نوکلئوتید در محل اتصال 2 پروب قابل شناسایی است و از این خصوصیت می توان برای طراحی پروب های اختصاصی جهت بررسی جهش های نقطه ای شناخته شده نیز استفاده نمود. حسن روش MLPA در آن است که می توان تعداد نسخه ژنی (deletion,duplication) با محدوده نامشخص را به راحتی و سریع مشخص کرد، در صورتیکه در روش Real-Time می بایست محل حذف و یا اضافه شدگی ها مشخص باشد.

کاربرد روش MLPA :

1-بررسی del/dup ژنومی بزرگ ژنومی با محدوده نامشخص یا در برگیرنده اگزون های متعدد مانند بررسی ژن دیستروفین در افراد مشکوک به دیستروفی عضلانی دوشن (با این روش علاوه بر تشخیص  بیماران، به سادگی می توان ناقلین را شناسایی کرد.)

2-شناسایی جهش های نقطه ای و پلی مورفیسم های (SNP,S) شناخته شده

3-بررسی کمی mRNA

4-بررسی وضعیت متیلاسیون مناطق پروموتری و یا imprinted

5-برسی DNA استخراج شده از بافت ( Paraffin imbedded یا formalin treated )

روش MLPA در مقایسه با سایر روش ها:

1-روش هایی مثل تعیین توالی، SSCP , DHPLC و... که برای تشخیص جهش های نقطه ای مورد استفاده قرار می گیرد قادر به شناسایی  تغیرات تعداد نسخه ژنی در محدوده وسیع در حد یک اگزون کامل نیستند.

2-روش FISH قادر به تشخیص جهش های کوچک نمی باشد.

3-روش Southern blots قادر به شناسایی حذف های تا چند کیلو باز می باشد ولی :

A .نیازمند به مقدار DNA بسیار زیاد و با کیفیت خوب می باشد.

B .نیاز به استفاده از پروب های رادیو اکتیو است.

C.بسیار زمان بر و دشوار می باشد.

4-روش Real-Time PCR قادر به شناسایی تغییرات در تعداد نسخه ژنی در یک محل واکنش می باشد.محدوده عمل آن بسیار محدود است.

مزایای استفاده از MLPA :

1-بررسی همزمان 40 تا 50 محل مختلف ژنومی در یک واکنش PCR صورت میگیرد.

2-به مقدار کمی DNA نیاز است.

3-برای انجام این آزمایش نیاز به یک دستگاه ترموسایکلر و سیستم الکتروفورز کاپیلری (Sequence type) می باشد.در صورت در دسترس نبودن سیستم الکتروفورز کاپیلری، محصول نهایی PCR را می توان در دمای 44 درجه نگهداری و یا به مراکز دیگر ارسال نمود.

4-سرعت جوابدهی با توجه به حجم اطلاعات به دست آمده، بالا می باشد. به طوری که می توان طی 24 ساعت همه مراحل تا تفسیر را انجام داد.

5-هزینه هر واکنش با توجه به حجم اطلاعات به دست آمده، بسیار مناسب می باشد.

6-این روش از دقت (Robustness) بالایی برخوردار است زیرا فقط از یک جفت پرایمر برای انجام تکثیر استفاده می شود و مشاهده سیگنال در هر محل، حاصل هیبرید شدن 2 پروب مستقل با ویژگی بالا و حساس به  تغییرات در حد یک نوکلئوتید می باشد.

7-روش کار برای کاربردهای گوناگون یکسان می باشد.

8-تمامی مواد لازم در یک کیت موجود می باشد.

با توجه به مزایای این روش، کاربرد آن در زمینه بررسی مولکولی بیماری های مختلف در حال گسترش می باشد. اکنون MLPA در زمینه شناسایی ناقلین و تشخیص افراد مبتلا به بیماری های ژنتیک مختلف، به خصوص  بیماری های ناشی از جهش های حذفی بزرگ و با محدوده ژنی متنوع مثل آلفا تالاسمی، بتا تالاسمی و دیسترفی عضلانی دوشن و... به کار می رود. در حال حاضر بیش از 300 کیت مختلف برای تشخیص بیماری های گوناگون و با اهداف تحقیقاتی در گروه های زیر موجود می باشد که لیست کامل آنها در سایت www.mrc-holland.com در دسترس می باشد. همچنین بر اساس نیاز و سفارش مشتریان امکان طراحی پروب برای  مناطق دیگر ژنومی نیز وجود دارد.

1-prenatal&postnatal

2-neurogenetics&mental retardation

3-hereditary cancer

4-tumour characteisation

5-methylation analysis

6-pharmacogenetics

7-various genetic disorders

8-mRNA analysis

9-low-resolution MLPA

10-basic research